Efeito do metotrexato veiculado por nanopartículas na ativação de inflamassomas e na remodelação cardíaca de ratos com infarto do miocárdio

Resumo

Apesar de avanços no tratamento do infarto agudo do miocárdio (IAM), a elevada morbidade e mortalidade pós-IAM sugere que mecanismos fisiopatológicos não estão completamente esclarecidos. A necrose dos miócitos desencadeia inflamação aguda que é seguida por processo crônico de remodelação cardíaca. O processo inflamatório se inicia quando receptores de reconhecimento padrão (PRRs) de células imunes inatas e células residentes cardíacas reconhecem substâncias liberadas por miócitos necróticos, ativando cascatas de sinalização que levam à produção de mediadores inflamatórios e recrutamento de leucócitos. Embora a inflamação seja útil na remoção de detritos celulares, sua persistência pode intensificar a remodelação cardíaca. Dentre os vários PRRs, destacam-se os receptores de ligação a nucleotídeo (NLRs). Alguns NLRs, como o NLRP3, são ativados ao reconhecerem moléculas liberadas por células necróticas e formam os inflamassomas, plataforma de proteínas que desencadeia ativação da caspase-1. Esta enzima cliva formas imaturas da pró-IL-1 ² e pró-IL-18 em formas maduras, que ativam e recrutam leucócitos induzindo a produção de mediadores inflamatórios. O inflamassoma NLRP3 participa na inflamação e progressão da disfunção ventricular. Embora os inflamassomas NLRP1 e NLRC4 estejam envolvidos em doenças inflamatórias, seu papel na remodelação pós-IAM não foi esclarecido. O metotrexato (MTX) é usado como imunomodulador em doenças inflamatórias autoimunes e associado a redução do risco cardiovascular. Estudo recente mostrou que o MTX associado a nanopartículas de núcleo lipídico (MTX-LDE) reduz o processo inflamatório pós-IAM e melhora a função cardíaca de roedores. Não identificamos estudos que tenham avaliado os efeitos do MTX nos inflamassomas acima citados. Neste projeto testaremos a hipótese que melhora da remodelação cardíaca pós-IAM induzida por MTX está relacionada a atenuação do processo inflamatório envolvendo os inflamassomas NLRP3, NLRP1 e NLRC4. O objetivo do estudo é avaliar os efeitos do MTX-LDE na ativação de inflamassomas, resposta inflamatória e remodelação cardíaca em ratos pós-IAM. Os objetivos específicos incluem: avaliação cardíaca por ecocardiograma; mensuração da área infartada por histologia; análise da expressão dos inflamassomas por Western blot e imunofluorescência; avaliação da expressão de genes que participam da via dos inflamassomas por RNA-seq; e quantificação da concentração sérica e miocárdica de citocinas por ELISA. Para analisar o processo inflamatório agudo pós-IAM, os ratos receberão MTX-LDE duas horas após a indução do infarto e serão avaliados três dias após, quando o miocárdico apresenta alto grau de inflamação. Os efeitos do MTX-LDE sobre a remodelação cardíaca tardia serão avaliados 120 dias após o IAM. Como não está esclarecido se inibição precoce do processo inflamatório é superior à inibição tardia, um grupo adicional de ratos será tratado com o MTX-LDE a partir de 21 dias após o IAM. (AU)