Desenvolvimento de teste imunocromatográfico para o diagnóstico da bartonelose felina (Bartonella henselae)

Resumo

Bartonella henselae, o agente etiológico da doença da arranhadura do gato (DAG), é a espécie de Bartonella mais comumente detectada em gatos e humanos no Brasil. Os felinos são reservatórios da bactéria, e o gato doméstico é considerado o principal elo na cadeia de transmissão do patógeno para os seres humanos. Estudos realizados no estado de São Paulo apontam que até90% dos gatos podem estar infectados com B. henselae. Assim, a identificação precoce e correta dos animais positivos é de suma importância para Saúde Animal e Saúde Pública. As abordagens utilizadas atualmente para o diagnóstico dessa enfermidade mostram limitações quanto à sensibilidade ou são demasiadamente elaboradas na sua execução, além de consumirem muito tempo. Nesse sentido, o teste imunocromatográfico mostra-se uma alternativa rápida, simples e com menor custo para o diagnóstico da bartonelose causada por B. henselae. Além disso, tal abordagem pode ser facilmente realizada in loco nas próprias clínicas e hospitais veterinários pelos próprios médicos veterinários por não exigir treinamento intensivo e dispensar o uso de quaisquer equipamentos. Nesse cenário, o presente estudo tem como objetivo desenvolver um kit de imunocromatografia para a detecção de anticorpos anti-B. henselae utilizando a proteína recombinante p58. Para tal, realizaremos a clonagem gênica e a subclonagem no vetor pET SUMO para a expressão heteróloga da proteína previamente identificada como imunodominante (resultados da fase I). Devido às limitações dos métodos de diagnósticos empregados atualmente, acreditamos que esta nova abordagem é necessária e será de grande valia no auxílio ao diagnóstico desta enfermidade. Por não existirem no mercado nacional metodologias alternativas para o diagnóstico da bartonelose, o desenvolvimento da presente proposta resultará na criação de um produto eficiente, de execução rápida e de custo acessível para o mercado nacional. Além da avaliação da reatividade da proteína recombinante p58 por meio da imunocromatografia, a proteína será empregada em ensaios de ELISA e Western-blotting (WB) e confrontadas com amostras de soro de gatos naturalmente infectados com B.henselae (AU)