Investigação de mecanismos celulares e moleculares associados à deficiência da enzima conjugadora de ubiquitina UBE2A

Resumo

A atividade de enzimas da via de ubiquitinação de proteínas é fundamental para o desenvolvimento e função sináptica, bem como para a homeostase mitocondrial e celular, e a desregulação dessas enzimas tem sido cada vez mais associada às doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas. Deficiência Intelectual (DI) é caracterizada por limitações cognitivas e déficit no comportamento adaptativo, que tipicamente persistem ao longo da vida do indivíduo, representando um problema socioeconômico e de saúde. O espectro de mutações na DI inclui atualmente uma variedade de proteínas da via de ubiquitinação de proteínas a qual, além de sinalizar proteínas para degradação, pode regular também outros processos celulares. UBE2A é uma enzima conjugadora de ubiquitina (E2) dessa via e foi reportada atuar em mecanismos de reparo de DNA, manutenção da integridade genômica, regulação da expressão de p53, remoção de mitocôndrias disfuncionais e regulação da atividade de proteassomo. As enzimas E2 geralmente determinam o tipo de sinal de ubiquitinação e, portanto, o destino da proteína substrato. Mutações no gene da UBE2A têm sido associadas à síndrome de DI de herança ligada ao X do tipo Nascimento. Uma nova mutação missense na UBE2A, Q93E, localizada no sítio catalítico da enzima, foi identificada em uma família de pacientes brasileiros com DI moderada. Essa mutação afeta a capacidade da enzima em transferir a ubiquitina para lisina, portanto, inibindo a formação do produto. Produzimos, no LNBio/CNPEM, um modelo de camundongo knockin portador dessa variante na UBE2A utilizando a tecnologia CRISPR/Cas9 e, estudos preliminares caracterizando o modelo apontaram alterações de citoarquitetura cerebral e de transmissão sináptica. Foi observado também que essas alterações se refletem no comportamento do animal UBE2A Q93E. Para se obter a melhor compreensão dos mecanismos pelos quais a deficiência de UBE2A induz as alterações supracitadas, propomos realizar estudos de morfologia e função mitocondrial, identificação de parceiros de interação, transcriptoma e proteoma global de ubiquitinação com o tecido cerebral do modelo murino da UBE2A, bem como realizar a validação de alvos e de vias celulares afetadas. Esses resultados devem trazer importantes contribuições para novas estratégias de uso de UBE2A e proteínas relacionadas como potenciais alvos terapêuticos para doenças neuronais. (AU)