Avaliação do efeito da terapia fotodinâmica antimicrobiana associada a DNAse no tratamento de candidose oral em camundongos infectados com Candida albicans

Resumo

O objetivo do estudo será avaliar a eficácia da terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) associada a enzima DNase (DNase I) no tratamento de candidose oral induzida em camundongos infectados com cepas de Candida albicans susceptível e resistente a fluconazol. Camundongos fêmeas (Swiss) com aproximadamente 5 semanas de vida serão imunossuprimidos e inoculados com diferentes cepas de C. albicans (107 UFC/mL) susceptível e resistente ao fluconazol. Após o estabelecimento da infecção, os 204 animais serão alocados nos respectivos grupos e submetidos aos tratamentos. Os animais do grupo aPDT (P+L+) serão tratados utilizando Photodithazine® (PDZ) 200 mg/L associado à luz LED de 50 J/cm2; no grupo (P+L-) será utilizado apenas o PDZ e outro grupo de animais serão tratados apenas luz LED (P-L+). Nos animais do grupo DNase a enzima será aplicada por 5 minutos. Também será avaliada a combinação das terapias, utilizando DNAse e aPDT (DNAse/P+L+). Um grupo será apenas inoculado com C. albicans (grupo P-L-) e outro será constituído de animais saudáveis (grupo CNI). Após os tratamentos, será realizada a recuperação de C. albicans por meio da fricção de swabs estéreis. Então diluições seriadas serão realizadas e plaqueadas em placas de Petri com Ágar Sabouraud Dextrose (SDA). Após 48 horas de incubação a 37°C, as colônias serão quantificadas e o número de UFC/mL será determinado. Os camundongos serão sacrificados 24 horas e 7 dias após os tratamentos. Além da avaliação microbiológica, será realizada a análise macroscópica e histológica das lesões. Será também analisada a resposta imune do hospedeiro (IL-6, IL-10, MCP-1, IFN-³, TNF, proteína IL-12p-70) em citometria de fluxo e expressão de ²-defensina (mBD1 e mBD2) via RT-qPCR. Técnicas de Microscopia Confocal a Laser serão utilizadas para marcação de estrutura 3D de componentes da matriz do biofilme. Para complementar essas análises, será avaliada a expressão de genes relacionados com a matriz extracelular (BGL2 e PHR1), estresse oxidativo (SOD1) e adesão ao substrato do hospedeiro (EFG1 e HWP1). Os resultados serão analisados pelo método estatístico mais apropriado. (AU)