Avaliação de metodologias de sequenciamento de nova geração (NGS) para diferenciação de gêmeos monozigóticos para aplicação forense

Resumo

A análise do DNA para investigações forenses baseia-se no conceito de que cada indivíduo é único geneticamente, exceto em casos de gêmeos monozigóticos (MZ). O DNA obtido de amostras biológicas é capaz de individualizar este material comparando do perfil genético da amostra biológica desconhecida (amostra questionável) com o perfil de uma amostra referência. Os marcadores mais usados na área forense, considerados padrão ouro, são os STRs (Short Tandem Repeats), analisados por meio de eletroforese capilar. O advento do sequenciamento de nova geração (NGS) e o desenvolvimento de kits para identificação humana com essa metodologia têm mostrado que essa aplicação começa a fazer parte de laboratórios de perícia ao redor do mundo. Estudos têm sido realizados para validação do uso desses novos kits de NGS em casos de identificação humana, em situações de mistura e pouca quantidade de DNA, mas não há nenhuma referência do potencial dessa aplicação para diferenciação de gêmeos MZ. Outras abordagens utilizando NGS têm sido alvos de estudos na tentativa de diferenciar gêmeos MZ na área forense, como padrão de metilação do genoma e variantes do DNA mitocondrial (mtDNA). Com o advento de kits para NGS do mtDNA, alguns poucos estudos têm reportado a observação de SNPs e heteroplasmias capazes de diferenciar gêmeos MZ. Uma vez que, até o momento, não existe nenhuma publicação avaliando a aplicação dos novos kits NGS de STR para eventual diferenciação de gêmeos MZ, esse projeto tem como objetivo geral avaliar a possibilidade de diferenciar gêmeos MZ usando essa abordagem de NGS. Como objetivos específicos propomos: a) estudar 32 pares de gêmeos monozigóticos usando o kit The Precision ID GlobalFiler" NGS STR Panel v2 (Thermo Fisher Scientific), por meio da análise das variações internas dos STRs (isoalelos) e das variantes (SNPs) adjacentes a essas regiões; b) comparar os perfis de STR gerados com metodologia padrão em eletroforese capilar com os perfis de STR gerados por NGS para avaliar a frequência de isoalelos, como uma análise preliminar na nossa população, uma vez que não há nenhum relato do uso desse kit na população brasileira. (AU)