Diagnóstico da infecção pelo SARS-CoV2, em diferentes materiais biológicos, em pessoas infectadas por esse vírus

Resumo

De forma geral o diagnóstico da infecção pelo SARS-CoV-2 em todo o mundo, ocorre na fase aguda da doença e por meio da identificação do vírus em amostras coletadas por swab de nasofaringe e eventualmente saliva. Pouco se conhece sobre a presença desse agente em outros materiais biológicos e em diferentes fases da doença. Da mesma forma, pouco se conhece sobre a associação da excreção desse agente nessas secreções e a resposta imune-humoral. O esclarecimento dessas informações poderia auxiliar na compreensão da história natural da doença e auxiliar no diagnóstico e manejo desses pacientes, esclarecendo importantes aspectos da transmissão interpessoal, hospitalar e comunitária deste agente. Objetivos 1 - Investigar a presença do SARS-CoV-2 em swab de naso faringe, saliva, urina, sangue e fezes, durante a fase aguda e de convalescença da infecção em pacientes imunocompetentes e imunodeprimidos; 2 - Investigar a presença do SARS-CoV-2 em saliva ou swab de naso-faringe de contactantes de pacientes com Covid-19; 3 - Correlacionar a presença do SARS-CoV 2 nesses materiais biológicos e os títulos de anticorpos neutralizantes e anticorpos do tipo IgG por ELISA; 4 - Investigar a taxa de permanência e infectividade do SARS-CoV-2 nesses pacientes durante a fase aguda e de convalescença da COVID-19. Metodologia - Trata-se de um estudo observacional, prospectivo, a ser desenvolvido em pacientes e contactantes assintomáticos desses pacientes, atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP, Instituto do Câncer do Estado de São Paulo (ICESP) e no município de São Caetano do Sul, com diagnóstico de infecção pelo SARS-CoV-2. Serão incluídos 125 pacientes, divididos em 3 grupos de pacientes: 1 - Pacientes sintomáticos sem diagnóstico de qualquer imunodepressão prévia (50 pacientes); 2 - Pacientes sintomáticos com diagnóstico de tumores sólidos ou candidatos a Transplante de Células-tronco Hematopoiéticas (25 pacientes); 3 - Contactantes assintomáticos destes pacientes (qualquer grupo - 50 pacientes). Coletas de sangue, urina, saliva, e swabs de naso faringe e anal serão realizadas durante 5 semanas seguidas, com intervalos de uma semana (dias 1, 7, 14, 21, 28) a iniciar até 72 horas do momento do diagnóstico em todos os pacientes dos grupos 1 e 2. Para pacientes do grupo 3, será coletada apenas saliva e swab de naso faringe no dia 1. Para a detecção de anticorpos anti-SARS CoV 2, serão utilizadas as técnicas sorológicas de ELISA e o ensaio de neutralização. Para identificação viral serão utilizadas técnicas de biologia molecular e cultivo viral. Ensaios quantitativos duplex (controle interno e gene N ou E) para SARS-CoV-2 serão realizados segundo protocolos adaptados, com os iniciadores e sondas para o ensaio de PCR em tempo real. O isolamento viral será realizado em laboratório de segurança nível 3 (NB-3), e as amostras serão submetidas a isolamento em células VeroE6, sabidamente susceptíveis a Coronavirus. (AU)