Caracterização da expressão de isoformas da NADPH oxidase na célula beta pancreática e sua modulação por citocinas pró-inflamatórias

Resumo

NADPH oxidases (NOX) são isoenzimas produtoras de espécies reativas de oxigênio (ERO). As isoenzimas NOX1, NOX2 e NOX4 são expressas em células beta pancreáticas e nossos estudos preliminares indicam a expressão das isoenzimas DUOX1 e DUOX2 em células beta in vitro. Contudo, isso ainda deve ser confirmado in vivo. Além do estresse oxidativo, as ERO participam na transdução de sinal e essa função depende da sua produção restrita à microdomínios intracelulares específicos: a localização intracelular de NOX determina a função de sinalizadora de ERO em muitos tecidos. A localização intracelular de NOX na célula ² permanece desconhecida. Documentar essa localização indicará a função dessas isoenzimas na (fisio)patologia da célula ². A insulite e a destruição das células beta contribuem para o Diabetes mellitus do tipo 1 (DM1). NADPH oxidases participam na apoptose da célula beta e citocinas liberadas na insulite parecem influenciar a expressão de NOX, mas a natureza dessa modulação permanece incerta. Entender a modulação de NOX por citocinas é indispensável para desvendar sua contribuição no apoptose da célula beta. Nesse projeto, propomos caracterizar a expressão de NADPH oxidases em células beta e sua modulação por citocinas pró-inflamatórias. A expressão de DUOX em ilhotas pancreáticas de roedores será confirmada por imunomarcação. A localização intracelular de isoenzimas NOX será estudada por imunocitoquímica e sua abundância relativa analisada por RT-qPCR e imunomarcação em INS-1E. Finalmente, a modulação da expressão de NOX por citocinas será estudada por RT-qPCR e imunomarcação em INS-1E e ilhotas cultivadas in vitro. O conhecimento obtido pode avançar o entendimento da (fisio)patologia da célula beta e da função de NOX nesse tecido. (AU)