Efeitos in vitro de RNAs não-codificantes (ncRNAs) humanos e do vírus de Epstein-Barr (EBV) em células imortalizadas derivadas de epitélio nasofaríngeo

Resumo

A infecção pelo EBV está associada a patogênese de distúrbios proliferativos e diversos cânceres humanos, notadamente a forma endêmica do Linfoma de Burkitt e a variante indiferenciada do carcinoma de nasofaringe. O EBV foi o primeiro vírus no qual pequenos RNAs não codificantes (miRs) foram encontrados codificados no genoma viral. Por outro lado, o importante papel que miRs endógenos humanos desempenham na carcinogênese tem sido sistematicamente verificado nas últimas duas décadas. Assim, além de sofrer a influência de miRs humanos, o desenvolvimento de cânceres humanos associados ao EBV pode ainda ser influenciado pelos miRs virais. O presente estudo visa verificar a hipótese de que mudanças nos níveis de expressão de determinados miRs endógenos humanos ou miR-BARTs do EBV em células imortalizadas de epitélio nasofaríngeo (CIEN) humano podem modificar suas propriedades biológicas e comportamento in vitro, de modo a favorecer a transformação celular ou aquisição de características relacionadas à agressividade biológica em cânceres. Para tanto serão gerados modelos baseados em linhagens de CIENs EBV-negativas com alteração na expressão de miRs endógenos humanos (miR-100, miR-192 e miR-574), e CIENs infectadas com EBV cujo genoma foi editado por CRISPR/Cas9 para deleção de miR-BARTs (miR-BART 7 e 9). As CIENs EBV-positivas e EBV-negativas indicadas serão então avaliadas quanto as taxas de proliferação, migração, invasão, e transformação celular in vitro. As alterações moleculares subjacentes aos efeitos possivelmente verificados nas CIENs com alteração na expressão de miRs endógenos (EBV-negativas) ou dos miR-BARTs virais (EBV-positivas) também serão avaliadas no que se refere à modulação de vias de sinalização intracelular relevantes na carcinogênese, tais como NF-ºB, PI3K/AKT e JAK/STAT (AU)