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Detecção de alterações relacionadas ao câncer de mama através de sensores de carga ou de massa acoplados a monocamadas de DNA

Full text
Author(s):
Marina Ribeiro Batistuti
Total Authors: 1
Document type: Doctoral Thesis
Press: Ribeirão Preto.
Institution: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (PCARP/BC)
Defense date:
Examining board members:
Marcelo Mulato; Carlos César Bof' Bufon; Emanuel Carrilho; Pedro Miguel de Lemos Correia Estrela; Lauro Tatsuo Kubota
Advisor: Marcelo Mulato; Paulo Roberto Bueno
Abstract

O biossensor eletroquímico foi amplamente utilizado devido à sua capacidade de Detecção rápida e precisa de uma grande variedade de moléculas alvo ou biomarcadores. Os sensores de hibridização do DNA são baseados no aumento da carga negativa na Superfície do eletrodo depois que o alvo do DNA se hibridar com as sondas imobilizadas. o O desenvolvimento desta plataforma exige primeiro uma compreensão da imobilização Processo e otimização da densidade da sonda de superfície. Nesta tese, o elétron A transferência é investigada em uma detecção de hibridação de DNA sem rótulas por sua intrínseca carregar. A investigação usando diferentes buffers de imobilização mostra uma forte Dependência de sua composição e concentração, e também a influência da Sonda e espaçador co-imobilizados para obter uma auto-montagem organizada e compacta Monocamada. A densidade da sonda é determinada usando o método de cronoculometria Com cloreto de hexaamminerutenio (III), onde o valor é calculado a partir do Número de moléculas redox catiónicas associadas eletrostática com o aniónico DNA backbone e apresentou uma relação linear entre a fração molar tiol E densidade de sonda de 2 a 5 x 1012 moléculas / cm2. O efeito da hibridação Foi determinado usando espectroscopia de impedância eletroquímica usando negativamente Casal redox ferri / ferrocianeto carregado em solução. Após a densidade da superfície da sonda Otimização, a mudança máxima da resistência à transferência de carga (20%) após 1 M A sequência complementar foi obtida com cerca de 25% de fração de sonda imobilizada Vii Viii Na superfície. Esta plataforma eletroquímica desenvolvida foi capaz de detectar 100 pM Da sequência alvo e distinguir sequências incompatíveis. O limite de detecção É maior quando comparado à literatura, no entanto, esse sistema pode ser mais Melhorou ampliando o sinal. A mesma plataforma é reproduzida no Sistema de microbalança de cristal de quartzo e com transistor de efeito de campo, comparando o Detecções diferentes. A mesma plataforma é testada usando dois diferentes HERMETO aptamer Sequências. Os aspectos biológicos são explorados para uma melhor compreensão do sistema (AU)

FAPESP's process: 13/26133-7 - Detection of changes related with breast cancer using charge sensors or mass sensors coupled to DNA monolayers
Grantee:Marina Ribeiro Batistuti
Support type: Scholarships in Brazil - Doctorate