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Participação na manutenção das culturas celulares em monocamada e 3D para avaliação da bioatividade de substâncias isoladas no desenvolvimento do temático 2015/17177-6

Processo: 20/03795-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Vigência (Início): 01 de abril de 2020
Vigência (Término): 31 de março de 2021
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
Pesquisador responsável:Glaucia Maria Machado Santelli
Beneficiário:Igor dos Santos Ribeiro
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:15/17177-6 - Abordagem integrada na prospecção sustentável de produtos naturais marinhos: da diversidade a substâncias anticâncer, AP.TEM
Assunto(s):Produtos naturais   Antineoplásicos   Oncologia

Resumo

O presente trabalho tem por objetivo a identificação e caracterização da atividade antiproliferativa seletiva para células tumorais de compostos caracterizados no projeto temático. Para tal, serão desenvolvidas culturas 3D de células de câncer de mama e de pulmões humanos. A manutenção e a caracterização das culturas constituirão a principal atividade da bolsista, uma vez que estas são de grande importância para a definição da confiabilidade dos teste de avaliação da bioatividade das substancias. Os estudos sobre o mecanismo de ação consistirão em avaliar eventos da biologia celular que são afetados pelas substâncias selecionadas em etapas anteriores. Ensaios específicos serão realizados por citometria de fluxo, western blot e microscopias óptica, em tempo real e confocal de varredura a laser, para a identificação de elementos determinantes envolvidos com o mecanismo de ação dos compostos. Nestes experimentos a bolsista atuará em colaboração com os pos-graduandos envolvidos no projeto. A possível interferência das substâncias selecionadas sobre a progressão do ciclo celular será avaliada inicialmente por citometria de fluxo. Alterações fase específicas serão investigadas pela análise da expressão de marcadores de cada fase do ciclo celular. Dependendo do efeito, serão analisados marcadores das fases alteradas, que poderá envolver a expressão de proteínas ou seus mRNAs (G0/G1 ou G2/M) ou a incorporação de EdU ou BrdU (fase S). O destino das células tratadas será seguido por microscopia em tempo real, sendo avaliada tanto a indução de morte celular como de senescência. A morte celular por apoptose será avaliada morfologicamente, por citometria de fluxo com kits específicos e pela análise da fragmentação do DNA. A senescência celular será inicialmente avaliada pela detecção de beta- galatosidade, hidrolase que ocorre apenas nas células senescentes (kit Senescence beta-Galactosidase Staining).